Electroforesis en gel de agarosa (Hongos) ANTOFAGASTA

PROPÓSITO DEL EXPERIMENTO: Cuantificar y Cualificar el ADN extraído.

I.-ESTRATEGIA: Se utilizó como colorante el Bromuro de Etidio

PROTOCOLO:

1.         Preparar el gel de Agarosa al 1%

  - Gel de Agarosa 1.5%     (20mL)                      

  - Agarosa                     0.385 g                                                                                                  - H2O destilada      20 mL                                                                                                         - TAE 50X                   8 µL                                                                                                        - Bromuro de etidio     1 µL

2.  Verter el gel (5mm de grosor) en una cubeta de 7cm por 7cm y sumergir en la cámara de electroforesis con buffer TAE 1X.

3.         Agregar 5µL de ADN con 2µL de Buffer de carga 5X y depositarlo en los pocillos.

4.         Depositar 3µL de Marcador de Peso Molecular 10Kb (HyperLadder I 100 lanes).

5.         Conectar la cámara de electroforesis a la fuente de poder calibrada a 80V durante 25min.

6.         Retirar el gel y observarlo en el Transiluminador.

MATERIALES Y REACTIVOS:

1.         Muestras de ADN extraídas en el primer experimento .

2.         Fuente de Poder Select Bioproducts BioVolt 300V

3.         Cámara de electroforesis Select Bioproducts

4.         Horno Microondas Samsumg

5.         Balanza Analítica Denver Instrument XL-3100 Max. 3100g e=0.01g

6.         Transiluminador UV.

7.         Micropipetas Axygen de 20µL y 1000µL

8.         Puntas para micropipeta de 20µL y 1000µL

9.         Racks para puntas.

10.      Agarosa.

11.      TAE 50X.

12.      Bromuro de etidio

13.      Agua Destilada.

1.-Preparación del gel de agarosa.

2.-Armado de la cubeta.

3.-Preparación del gel de agarosa con TAE (1X) 

4.-Se agrego 10 µL de Bromuro de etidio

5.-Se armo la cámara de electroforesis

6.-Se coloca el gel de agarosa preparado en una cubeta de 7 cm x 7 cm

7.-Se sumerge en la cámara de electroforesis con buffer TAE 1X.

8.-Se agrego 5µL de carga 5X y se deposito sobre el papel  parafilm

9.-Se depositó 3µL de Marcador de Peso Molecular 10Kb (HyperLadder I 100 lanes),

10.-Se conectó la cámara de electroforesis a la fuente de poder calibrada a 70V durante 45 minutos siendo el cable rojo=positivo y el cable negro=negativo por tanto la corrida electroforética va de negativo a positivo.