REACTIVOS
- - Acrilamida
- - Bisacrilamida
- - Urea
- - TEMED
- - Persulfato de Amonio
- - Buffer TAE 50X
- - Agua Milli Q
- - Formamida desionizada
- - SYRB Gold o Red Gel (Biotium)
PASO 1
-
PREPARAR SOLUCIÒN A.B.A. 40%
(Acrilamida/BisAcrilamida). La solución stock será de 50 mL.
-18,75 g de acrilamida
-0,5 g de Bisacrilamida
-50 mL de agua filtrada (0,22 µm) estéril
PASO 2
-
Con la solución stock ABA preparar solución stock
(100%) y B (0%)
Solución
A : 100 mL
ABA : 18,8 mL
Urea : 42 g (PM: 60,06 / mol)
Formamida : 40 mL
Buffer TBE o TAE 10X : 2 mL
Agua destilada filtrada (0,22 µm) : 100 mL
Solución
B: 100 mL
ABA : 18,8 mL
Buffer TBE o TAE 10X: 2 mL
Agua
destilada filtrada (0,22 µm) : 100 mL
Gradiente 60 % 9 mLsolución stock 80% 3 mL solución stock 0%
Gradiente 40 %
6 mL solución stock 80%
6
mL solución stock 0%
Agregar a ambas soluciones
TEMED : 11µL
APS : 100 µL
Protocolo PCR para bacterias
- Agua miliQ = 132 µL
- Buffer PCR = 50 µL
- MgCl2 = 20 µL
- Primer R = 10µL 904R
- Primer F = 10µL 341-GC
- dNTP = 5 µL
- Taq Polimerasa= 2,5 µL
- Muestra = 2 µL
TOTAL = 250 µL
Protocolo PCR para hongos
- Agua miliQ = 132 µL
- Buffer PCR = 50 µL
- MgCl2 = 20 µL
- Primer R = 10µL Uni1392 reverse
- Primer F = 10µL EuK1209F-GC
- dNTP = 5 µL
- Taq Polimerasa= 2,5 µL
- Muestra = 2 µL
TOTAL = 250 µL
- Agua miliQ = 132 µL
- Buffer PCR = 50 µL
- MgCl2 = 20 µL
- Primer R = 10µL Uni1392 reverse
- Primer F = 10µL EuK1209F-GC
- dNTP = 5 µL
- Taq Polimerasa= 2,5 µL
- Muestra = 2 µL
TOTAL = 250 µL
Protocolo PCR para bacterias
- Agua miliQ = 132 µL
- Buffer PCR = 50 µL
- MgCl2 = 20 µL
- Primer R = 10µL 904R
- Primer F = 10µL 341-GC
- dNTP = 5 µL
- Taq Polimerasa= 2,5 µL
- Muestra = 2 µL
TOTAL = 250 µL
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